Page 123 - 104 ปี เทพสตรี มหาวิทยาลัยเพื่อการพัฒนาท้องถิ่น

ส่วินที� 2 การวิิเคราะห์ โปัรตีน ไขมัน น�ำตาลั คาร์โบูไฮเดีรต ควิามช่�น ปัริมาณน�ำอิสระ

แลัะจัุลัินทรีย์
1. ที่ำการวิเคืราะห์ โปรตีน ไขมีัน น�ำตาลั คืาร์โบไฮเดรต คืวามีชัื�น ปริมีาณิน�ำอัิสระ แลัะจุลัินที่รีย์
1.1 วิธีวิเคืราะห์โปรตีนด้วยวิธี Kjeldahl method (AOAC, 2000)

1) ใชั้ตัวอัย่างกลั้วยตาก 0.5 กรัมี เติมีลังใน Kjeldahl tube จากนั�น เติมีตัวเร่งปฏิกิริยา
ลังไป 2 เมี็ด แลัะกรดซึ่ัลัฟิวริกเข้มีข้นปริมีาณิ 25 มีิลัลัิลัิตร
2) นำไปย่อัยด้วยเคืรื�อังย่อัย ที่ี�อัุณิหภัูมีิ 250 อังศาเซึ่ลัเซึ่ียส นาน 30 นาที่ี แลั้วที่ำการ
เพัิ�มีอัุณิหภัูมีิเป็น 360 อังศาเซึ่ลัเซึ่ียส ย่อัยจนได้สารลัะลัายใส ที่ิ�งไว้จนอัุณิหภัูมีิลัด ลังเที่่าอัุณิหภัูมีิห้อัง
แลั้วเติมีน�ำากลัั�น 50 มีิลัลัิลัิตร

3) จากนั�นนำเข้าเคืรื�อังกลัั�น ใส่กรดบอัริกคืวามีเข้มีข้น 4 เปอัร์เซึ่็นต์ ลังไป 25 มีิลัลัิลัิตร
แลัะหยดอัินดิเคืเตอัร์ 3 หยดในขวดรูปชัมีพัู่ เติมีสารลัะลัายโซึ่เดียมีไฮดรอักไซึ่ด์คืวามีเข้มีข้น 40 เปอัร์เซึ่็นต์
ลังในหลัอัดตัวอัย่าง 20-40 มีิลัลัิลัิตร

4) นำตัวอัย่างที่ี�ผ่านการกลัั�นมีาไที่เที่รตด้วยสารลัะลัายมีาตรฐานกรดซึ่ัลัฟิวริกเข้มีข้น
0.1 นอัร์มีอัลั จนสารลัะลัายเปลัี�ยนเป็นไมี่มีีสี บันที่่กปริมีาตรที่ี�ใชั้
1.2 วิธีวิเคืราะห์ไขมีันด้วยวิธี Soxhlet Method (AOAC , 2000)
1) ชัั�งน�ำหนักตัวอัย่างแห้งประมีาณิ 2 กรัมี แลัะนำบีกเกอัร์มีา อับเพัื�อัขจัดคืวามีชัื�นที่ี�
อัุณิหภัูมีิ 110 อังศาเซึ่ลัเซึ่ียส นาน 45 นาที่ี ที่ิ�งไว้ให้เย็นในโถึดูดคืวามีชัื�น จากนั�นชัั�งน�ำหนักขอังบีกเกอัร์

(W1 )
2) นำบีกเกอัร์มีาต่อัเข้ากับ Extraction tube แลัะ Holder เติมีปิโตรเลัียมีอัีเธอัร์ลังใน
บีกเกอัร์ 140 มีิลัลัิลัิตร แลั้วนำเข้าเคืรื�อังวิเคืราะห์ไขมีันเพัื�อัสกัดไขมีัน

3) นำบีกเกอัร์มีาอับเพัื�อัขจัดคืวามีชัื�นที่ี�อัุณิหภัูมีิ 110 อังศาเซึ่ลัเซึ่ียส นาน 45 นาที่ี ที่ิ�ง
ไว้ให้เย็นใน โถึดูดคืวามีชัื�นจากนั�นชัั�งน�ำหนักขอังบีกเกอัร์
1.3 วิธีวิเคืราะห์เยื�อัใย (AOAC, 1990)
1) ใชั้ตัวอัย่างที่ี�ผ่านการสกัดไขมีันแลั้ว 2 กรัมี ใส่ลังบีกเกอัร์ บันที่่กน�ำหนัก เติมีกรด
ซึ่ัลัฟิวริกเข้มีข้น 1.25 เปอัร์เซึ่็นต์ ลังไป 200 มีิลัลัิลัิตร ต้มีให้เดือัด 30 นาที่ี

2) นำมีากรอังด้วย Buchner funnel จากนั�นลั้างตะกอันด้วยน�ำร้อันจนหมีดคืวามีเป็นก
รด นำตะกอันที่ี�ได้ใส่ลังบีกเกอัร์ แลั้วเติมีสารลัะลัายโซึ่เดียมีไฮดรอักไซึ่ด์ เข้มีข้น 1.25 เปอัร์เซึ่็นต์ ลังไป
200 มีิลัลัิลัิตร ต้มีให้เดือัด 30 นาที่ี แลั้วนำมีากรอังด้วย Buchner funnel อัีกคืรั�ง

3) ลั้างตะกอันด้วยน�ำร้อันจนคืวามีเป็นด่างหมีด ถึ่ายตะกอันลังใน Sintered glass แลั้ว
ลั้างตะกอันอัีกคืรั�งด้วยแอัลักอัฮอัลั์ 95 เปอัร์เซึ่็นต์ ปริมีาณิ 15 มีิลัลัิลัิตร
4) นำ Sintered glass อับที่ี�อัุณิหภัูมีิ 110 อังศาเซึ่ลัเซึ่ียส 2 ชัั�วโมีง ชัั�งน�ำหนักแลั้วนำ
Sintered glass เข้าไปเผาที่ี�อัุณิหภัูมีิ 300 อังศาเซึ่ลัเซึ่ียส นาน 5 ชัั�วโมีง ชัั�งน�ำหนัก Sintered glass หลัังเผา
1.4 วิธีวิเคืราะห์เถึ้าด้วย (AOAC, 2000)

1) ชัั�งน�ำหนักตัวอัย่างแห้งประมีาณิ 5 กรัมีใส่ลังใน Crucible ที่ี�ที่ราบน�ำหนักแน่นอัน
2) นำไปเผาที่ี�อัุณิหภัูมีิ 600 อังศาเซึ่ลัเซึ่ียส นาน 2 ชัั�วโมีง หรือัจนได้เถึ้าสีขาวแลั้วที่ิ�งไว้
ให้เย็นในโถึดูดคืวามีชัื�น จากนั�นชัั�งน�ำหนักขอัง Crucible

104 ปีี เทพสตรีี มหาวัิทยาลัยเพ่�อการีพัฒนาท้องถิ่ิ�น >> 121